该限制性内切酶识别5'-G↑AATTC-3'的酶切位点，并在EcoRI缓冲液中有最佳活性。
分子克隆等
高酶浓度和非最佳缓冲液的使用可能导致星活性， 使用BSA时不要长时间孵育。 为了获得更高的活性，应将BSA加入到1X 反应混合物中至最终浓度为100 μg/ ml。
5 KU/管EcoRI，10X buffer EcoR I,10X Single buffer
| 识别位点 | 5'-G↑AATTC-3' |
| 来源 | 携带来自大肠杆菌的ecoRIR克隆基因的重组大肠杆菌 |
| 最适缓冲液 | 10X EcoR I buffer(500 mM Tris-HCl（pH 7.5），100 mM MgCl2，1000 mM NaCl，0.2% Triton X-100，1 mg/mL BSA) |
| 通用缓冲液 | 10X Single buffer |
| 孵育 | 37°C |
| 酶活定义 | 1 U酶是在1 h，37°C，总反应体积为50 μl 时水解1 μg λDNA所需的酶 |
| 储存 | -20°C |
| 储存条件 | 10 mM磷酸钾（pH 7.4，25°C)，300 mM NaCl，1 mM EDTA，1 mM DTT，0.2 mg/mL BSA，0.15% Triton X-100，50%甘油 |
| 连接与重切 | 使用 10 倍酶量消化底物，回收酶切产物。在 22°C 下使用适量 T4 DNA 连接酶可以将超过 95%的酶切产物重新连接。将连接产物再次回收后，使用相同的内切酶可以重新切开超过 95%的连接产物 |
| 甲基化影响 | dam甲基化不敏感， dcm甲基化不敏感，CpG甲基化敏感 |
| 热失活 | 在65°C加热20分钟失去活性 |
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