产品属性
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产品描述
概述
该限制性内切酶识别5'-G↑AATTC-3'的酶切位点,并在EcoRI缓冲液中有最佳活性。
特点
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所有酶都适用于通用的Single Buffer缓冲液,可在统一反应体系内任意组合,无需多次单酶切或更换酶切缓冲液,方便、稳定、快速、可精准切割载体。
应用
分子克隆等
使用说明
高酶浓度和非最佳缓冲液的使用可能导致星活性, 使用BSA时不要长时间孵育。 为了获得更高的活性,应将BSA加入到1X 反应混合物中至最终浓度为100 μg/ ml。
组分
5 KU/管EcoRI,10X buffer EcoR I,10X Single buffer
属性
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识别位点
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5'-G↑AATTC-3'
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来源
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携带来自大肠杆菌的ecoRIR克隆基因的重组大肠杆菌
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最适缓冲液
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10X EcoR I buffer(500 mM Tris-HCl(pH 7.5),100 mM MgCl2,1000 mM NaCl,0.2% Triton X-100,1 mg/mL BSA)
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通用缓冲液
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10X Single buffer
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孵育
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37°C
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酶活定义
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1 U酶是在1 h,37°C,总反应体积为50 μl 时水解1 μg λDNA所需的酶
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储存
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-20°C
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储存条件
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10 mM磷酸钾(pH 7.4,25°C),300 mM NaCl,1 mM EDTA,1 mM DTT,0.2 mg/mL BSA,0.15% Triton X-100,50%甘油
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连接与重切
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使用 10 倍酶量消化底物,回收酶切产物。在 22°C 下使用适量 T4 DNA 连接酶可以将超过 95%的酶切产物重新连接。将连接产物再次回收后,使用相同的内切酶可以重新切开超过 95%的连接产物
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甲基化影响
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dam甲基化不敏感, dcm甲基化不敏感,CpG甲基化敏感
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热失活
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在65°C加热20分钟失去活性
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